Caracterización de la congelabilidad y mejora de los diluyentes de crioconservación espermática en porcino ibérico - Mercado de la Peña, Eduardo de. (Universidad Complutense de Madrid, 2011)
El cerdo Ibérico es una raza autóctona española en la que quedan englobadas diferentes variedades y estirpes de cerdos de la península Ibérica y sus islas. Su censo se ha visto disminuido notablemente desde la década de los 50, debido a factores como la peste porcina africana, el cambio en la estructura productiva y el sobrecruzamiento con razas más prolíficas como el Duroc Jersey, usándose mayoritariamente solo las variedades Ibéricas con mejores índices reproductivos y productivos. Esto hace que cada vez se utilicen menos, determinadas variedades, lo que causa la pérdida de variabilidad genética intrínseca de esta raza. Para conservar esta variabilidad, una de las técnicas actuales más utilizadas es la crioconservación espermática. Esta técnica está bien tipificada y es de fácil repetibilidad entre laboratorios, pero en la que existe el problema de la selección de los animales destinados para la conservación de su genética. Esta selección es un problema porque existe una susceptibilidad individual al proceso de congelación espermática en la especie porcina, encontrándose animales cuyos espermatozoides congelarán bien y otros que no. Además otro problema del proceso de crioconservación es que los diluyentes usados para la congelación, no han sufrido modificaciones en más de 20 años y además, durante este proceso se desecha una parte fundamental del eyaculado, el plasma seminal. Los objetivos de este trabajo han sido la caracterización bioquímica y funcional del eyaculado de cerdo Ibérico y el estudio de su congelabilidad, la determinación precoz de machos por su congelabilidad usando el ChemSensor, la determinación del diluyente más adecuado para la crioconservación espermática del cerdo Ibérico, así como el estudio del efecto de la inclusión del plasma seminal en el proceso de crioconservación para tratar de conservar el eyaculado completo.Para el estudio de la congelabilidad, se valoraron post-descongelación 37 eyaculados de cerdos Ibéricos de distintas variedades, teniendo en cuenta su viabilidad y motilidad total para su clasificación. Dichos resultados se correlacionaron con el perfil obtenido del análisis de los compuestos volátiles del semen, de la composición lipídica de la membrana del espermatozoide y del plasma seminal, así como de la composición proteica del plasma seminal. Para cada uno de los casos se determinaron 2 grupos de congelabilidad, buenos y malos congeladores, obteniendo solo diferencias significativas en el caso de las proteínas seminales, pudiéndose relacionar un mayor porcentaje de las proteínas de 15-kDa con animales que presentan una buena congelabilidad espermática. En cuanto a la diferenciación precoz de los animales por su congelabilidad espermática, se obtuvieron buenos resultados en la determinación entre los dos grupos de congelabilidad (buenos y malos congeladores). Observándose que el uso del semen completo para la discriminación, es la manera más fiable de diferenciar los eyaculados y aunque las distancias de separación encontradas entre los dos grupos de congelabilidad, no eran significativas, al tener un número tan bajo de réplicas se podrían considerar adecuadas. Para la determinación del diluyente más adecuado para la crioconservación espermática del cerdo Ibérico, se compararon tres tipos de diluyentes basados en tres técnicas diferentes según autores: Westendorf et al., 1975; Pursel y Johnson, 1975 y Thilmant, 1997, siendo éste último el diluyente de congelación que recomienda la FAO (Food and Agriculture Organization of the United Nationes, 1998) para la conservación de recursos zoogenéticos porcinos. Y completando este experimento se evaluó el efecto de la inclusión del Orvus es Paste en el diluyente a y II (Thilmant, 1997) o solo en el diluyente II (Westendorf et al., 1975 y Pursel y Johnson, 1975). En los resultados obtenidos se observó que el diluyente de Westendorf et al., 1975 (Lactosa-yema de Resumen huevo) con Orvus es Paste solo en el diluyente II era el medio de congelación más adecuado para la crioconservación de espermatozoides de cerdo Ibérico. Asimismo, este mismo diluyente se usó para investigar el efecto de la inclusión del plasma seminal en el medio de congelación, sustituyendo el agua de dilución por diferentes porcentajes de plasma seminal (0%, 10%, 25%, 50%, 75% y 100%). Los resultados obtenidos mostraron que por encima de un 25% de plasma seminal en el medio, la osmolaridad de este se elevaba notablemente, produciendo un daño sobre las membranas de los espermatozoides. Además se observó que el diluyente con un 25% de plasma seminal mantenía durante más tiempo las características óptimas de los espermatozoides, determinándose un efecto protector del plasma seminal a lo largo del tiempo de incubación y siendo solo significativo cuando el plasma seminal se encontraba durante el proceso de congelación y no solo durante la descongelación. Los resultados de este trabajo indican que es posible mejorar la crioconservación espermática del cerdo ibérico, tanto usando un diluyente adecuado, como incorporando un 25% de plasma seminal a dicho medio, así como seleccionando previamente aquellos machos que vayan a congelar bien por medio del ChemSensor. Asimismo se ha observado que mediante el estudio de diferentes compuestos del eyaculado, la resistencia al proceso de congelación esta más relacionada con las proteínas del plasma seminal, que con la composición en ácidos grasos de la membrana del espermatozoide.