Estudio de la expresión del receptor mGluR1a del sistema nervioso central de "Rattus novergicus" en la levadura "Schizosaccharomyces pombe" y líneas celulares de mamífero - Regidor Cerrillo, Javier. (Universidad Complutense de Madrid, 2001)
Los receptores metabotrópicos del L,-Glutamato del SNC están implicados en procesos tan importantes como el aprendizaje .y. memoria, neurotoxicidad y enfermedades como el Parkinson o Alzheimer; y el desarrollo de agonistas o antagonistas selectivos de estos receptores podría constituir una terapia frente a estos desordenes. El estudio de estos receptores conlleva la puesta a punto de un sistema donde su expresión sea funcional y de forma aislada. Así, se pensó en utilizar la levadura S. Pombe como sistema de expresión funcional del receptor metabotrópico mGluRla de Rattus novergicus, acoplando este receptor a la cascada de apareamiento. En S. Pombe, se comprobó los altos niveles de expresión y la correcta localización ,en la membrana plasmática, del mGluRla, aunque no se consiguió su acoplamiento funcional a la cascada de apareamiento, comprobado mediante un sistema donde el promotor del gen sxa2 +(cuya expresión esta regulada por esta cascada) está fusionado a GFP. Proteínas quiméricas obtenidas mediante la fusión del mGIuR1 a la subunidad Gpalp de S. pombe. o a una subunidad quimérica, donde el extremo carboxi-ter-minal de Gpalp se sustituyó por el de la subunidad G0 de Xenopus lavéis, dieron el mismo resultado. Posteriores estudios de unión al ligando radiactivo L-Glutamico y de dimerización del mGluRla, mostraron su incapacidad de unir ligando y de dimerizarse, , indicando que este no presentaba la conformación funcional correcta. Por otro lado, se estudio la línea celular 45.EM18, una línea linfoblastoide de humanos, como sistema de expresión del mGIuRla. La expresión funcional del receptor a los niveles detectados. indicaron lo adecuado de esta línea celular como sistema heterólogo. Por último, mediante estudios de inmunoprecipitación e inmunocitoquímicos de muestras del SNC de rata, macaco y humanos se comprobó la especificidad de los anticuerpos desarrollados en nuestro Departamento frente al mGluR1 de estas especies.